| 猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定 |
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| 引用本文： | 马世杰,李 坤,付朋飞,等.猪IFN-α基因在干酪乳酸杆菌中的表达及反应活性鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(7):29-34. |
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| 作者姓名： | 马世杰 李 坤 付朋飞 等 |
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| 作者单位： | 河南农业大学 牧医工程学院,河南农业大学 牧医工程学院,河南农业大学 牧医工程学院 |
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| 基金项目： | 河南省重大科技专项（111100110300） |
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| 摘 要： | 【目的】构建能够稳定表达猪α-干扰素(IFN-α)成熟蛋白的重组干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei CECT5276),为将其作为口服疫苗来提高动物机体免疫力奠定基础。【方法】从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪IFN-α成熟蛋白基因,再将其定向克隆到干酪乳酸杆菌整合型表达载体pMJ67的lac启动子下游,得到重组质粒pMJ67-IFN-α,电穿孔转化干酪乳酸杆菌。抽提干酪乳酸杆菌基因组DNA,进行PCR扩增及测序鉴定。采用半定量RTPCR检测猪IFN-αmRNA在干酪乳酸杆菌中的转录水平;采用Western blot对重组干酪乳酸杆菌菌体进行分析,检测其表达产物的活性;用双抗体夹心ELISA法确定最适的乳糖诱导质量浓度。【结果】PCR扩增获得了501bp的IFN-α,成功构建了重组质粒pMJ67-IFN-α,转化干酪乳酸杆菌后获得了重组乳酸杆菌。半定量RT-PCR结果显示,IFN-αmRNA在诱导16h时表达水平最高;Western blot分析表明,构建的重组干酪乳酸杆菌成功表达出了相对分子质量约19ku的重组蛋白,其可与鼠抗猪IFN-α抗体发生特异性反应。ELISA结果表明,当乳糖诱导质量浓度达到8g/L时,猪IFN-α成熟蛋白的表达量达到最大,为1.3μg/L。【结论】将猪IFN-α成熟蛋白基因整合到干酪乳酸杆菌基因组中,构建的重组乳酸杆菌能够稳定表达猪IFN-α成熟蛋白。
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| 关 键 词： | 猪α-干扰素 干酪乳酸杆菌 电穿孔转化 抗病毒 |
| 收稿时间： | 2014/1/10 0:00:00 |
Expression and reactivity of porcine interferon-alpha in Lactobacillus casei |
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| MA Shi-jie,LI Kun and FU Peng-fei,et al.Expression and reactivity of porcine interferon-alpha in Lactobacillus casei[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(7):29-34. |
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| Authors: | MA Shi-jie LI Kun and FU Peng-fei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | porcine interferon-alpha Lactobacillus casei electroporation antiviral |
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