β-伴大豆球蛋白对IPEC-J2细胞损伤的作用机制研究

【目的】研究β-伴大豆球蛋白通过核因子-κB(NF-κB)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、c-Jun N端激酶(JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路对猪肠上皮细胞（IPEC-J2）造成损伤的差异，为探索β-伴大豆球蛋白引发仔猪肠道黏膜损伤的分子机制提供理论依据。【方法】采用β-伴大豆球蛋白体外诱导IPEC-J2损伤，试验设对照组T0（猪肠上皮细胞不做处理），试验组T1（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白）、T2（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L NF-κB抑制剂二硫氨基甲酸肽吡咯烷（PDTC））、T3（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L iNOS抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME））、T4（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L JNK抑制剂SP600125）和T5（加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白+1 μmol/L p38抑制剂SB202190），处理24 h后观察细胞结构，测定各组细胞活性及细胞因子NO、TNF-α、IL-10、IFN-γ含量，细胞损伤相关基因NF-κB p65、iNOS、JNK、p38及其编码蛋白的表达水平。【结果】在IPEC-J2中加入5 mg/mL β-伴大豆球蛋白24 h后，细胞数量减少，线粒体改变，染色质边集，细胞活性显著下降（P<0.05），NO、TNF-α、IFN-γ含量均极显著增加（P<0.01），而IL-10含量极显著减少（P<0.01），NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA表达水平极显著升高（P<0.01），NF-κB、iNOS、JNK、p38蛋白表达量极显著上升（P<0.01）；加入抑制剂后，细胞活性显著提高（P<0.05），细胞结构趋于完整和规则，IL-10含量极显著增加（P<0.01），而NO、TNF-α、IFN-γ含量极显著减少（P<0.01），NF-κB p65、iNOS、JNK和p38-mRNA及其编码蛋白表达受到抑制。其中T2组细胞活性显著高于T3、T4、T5组（P<0.05），细胞数量、形态和完整性最接近对照组细胞。【结论】β-伴大豆球蛋白主要通过NF-κB/iNOS信号通路对IPEC-J2造成损伤，PDTC对这种损伤作用的抑制效果最好。