| 以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 邓明俊,肖西志,朱来华.以金磁微球为载体的H5N1 AIV免疫PCR检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010,38(12):13-19. |
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| 作者姓名： | 邓明俊 肖西志 朱来华 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院；山东出入境检验检疫局;西北农林科技大学 动物医学院；山东出入境检验检疫局;山东出入境检验检疫局 |
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| 基金项目： | 山东出入境检验检疫局科技项目（SK200601） |
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| 摘 要： | 【目的】将高特异性的抗原-抗体反应与高灵敏性的PCR扩增技术相结合,建立快速检测低浓度H5N1禽流感病毒(Avianinfluenzavirus,AIV)的免疫PCR方法。【方法】以pUC19为模板,采用5′端标记有生物素的引物进行PCR扩增,制备含有生物素的报告DNA分子。以金磁微球为固相吸附载体,通过亲和素-生物素的桥联作用,将含有生物素的报告DNA分子与生物素标记的抗AIVH5N1血凝素蛋白的检测抗体分子连接,H5N1AIV与检测抗体结合后,体外扩增报告DNA,间接放大低含量病毒信号,建立可有效检测微量H5N1AIV的免疫PCR方法。对建立的免疫PCR方法的最适报告DNA浓度、最适链亲和素工作浓度、灵敏度和特异性进行确定和评价。【结果】建立的免疫PCR方法最适报告DNA质量浓度为1ng/mL,最适链亲和素工作质量浓度为20ng/mL,该方法可成功检测到10-4EID50/mL的H5N1AIV,而且特异性良好。【结论】建立的以金磁微球为吸附载体的免疫PCR是一种灵敏度高、特异性好的检测微量H5N1AIV的方法。
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| 关 键 词： | 免疫PCR H5N1禽流感病毒 金磁微球 |
| 收稿时间： | 2010/10/9 0:00:00 |
Immuno PCR for detection of H5N1 avian influenza virus using magnetic gold particles as carriers |
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| DENG Ming-jun,XIAO Xi-zhi,ZHU Lai-hua,XIN Xue-qian,ZHENG Xiao-long,WANG Qun,ZHANG Yan-ming.Immuno PCR for detection of H5N1 avian influenza virus using magnetic gold particles as carriers[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2010,38(12):13-19. |
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| Authors: | DENG Ming-jun XIAO Xi-zhi ZHU Lai-hua XIN Xue-qian ZHENG Xiao-long WANG Qun ZHANG Yan-ming |
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| Institution: | 1(1 College of Veterinary Medicine,Northwest A&F Univercity,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,Qingdao,Shandong 266002,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Immuno-PCR H5 subtpye avian influenza virus magnetic gold particles |
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