| 西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 赵旺生,罗 军,王 伟.西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2010,38(12):38-44. |
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| 作者姓名： | 赵旺生 罗 军 王 伟 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室 |
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| 基金项目： | 转基因生物新品种培育项目（2009ZX08009-162B）；公益性行业（农业）专项科研经费项目（3-45）；陕西省重大科技创新项目（2009ZKC07-01-1） |
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| 摘 要： | 【目的】构建西农萨能羊BTN基因RNA干扰的重组腺病毒载体,为研究BTN基因的功能和作用机制奠定基础。【方法】设计并合成3对针对BTN不同位点的shRNA编码序列,克隆到pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA载体中,并与已构建好的表达BTN的pDsRed1-C1-BTN载体共转染HEK293细胞,筛选有效的干扰序列。通过与腺病毒骨架质粒重组,制备表达干扰BTN基因的shRNA的腺病毒,经PacⅠ线性化后,在HEK293细胞中包装并扩增病毒,用TCID50法进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清液。【结果】成功构建了西农萨能羊BTN基因的RNAi腺病毒表达载体,腺病毒经包装和扩增后,病毒滴度可达到5×109PFU/mL。【结论】获得了有功能的pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA病毒重组子。
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| 关 键 词： | 嗜乳脂蛋白基因 RNA干扰 腺病毒载体 |
| 收稿时间： | 2010/4/21 0:00:00 |
Screening of RNA interference sequence and construction and identification of BTN recombinant adenovirus of Xinong Saanen Goat |
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| ZHAO Wang-sheng,LUO Jun,WANG Wei,TENG Yan-ling,WANG Zhen,LIN Xian-zi.Screening of RNA interference sequence and construction and identification of BTN recombinant adenovirus of Xinong Saanen Goat[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2010,38(12):38-44. |
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| Authors: | ZHAO Wang-sheng LUO Jun WANG Wei TENG Yan-ling WANG Zhen LIN Xian-zi |
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| Institution: | (College of Animal Science and Technology of Northwest A&F University,Shaanxi Provincial Key Laboratory of Agricultural Molecular Biology,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | BTNgene RNA interference adenoviral vector |
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