| 肝片吸虫CatL1D蛋白的免疫原性研究 |
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| 引用本文： | 王熙凤,孟庆玲,乔 军,等.肝片吸虫CatL1D蛋白的免疫原性研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2019,47(5):1-6. |
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| 作者姓名： | 王熙凤 孟庆玲 乔 军 等 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2017YFD0501200）；兵团国际科技合作项目（2016AH006） |
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| 摘 要： | 【目的】研究绵羊肝片吸虫(Fasciola hepatica,Fh)CatL1D蛋白的分子特征和免疫原性。【方法】利用RT-PCR技术扩增出CatL1D基因,用相关软件分析其编码蛋白的生物学信息。将CatL1D基因克隆入表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-CatL1D,进行BamHⅠ/XhoⅠ双酶切和测序鉴定。将pET-CatL1D载体转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blot分析;以纯化后的重组蛋白CatL1D为抗原免疫小鼠,利用间接ELISA方法检测抗体效价,分析其免疫原性。【结果】成功克隆了CatL1D基因,该基因全长981 bp,编码326个氨基酸,其中第21-79位氨基酸为组织蛋白酶前肽抑制剂结构域,第108-321位氨基酸为木瓜蛋白酶家族半胱氨酸蛋白酶保守结构域;CatL1D蛋白含有6个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、11个豆蔻酰化位点、1个蛋白激酶C磷酸化位点,含有10个优势抗原表位。成功构建了pET-CatL1D原核表达载体,诱导表达出CatL1D重组蛋白;SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组蛋白CatL1D分子质量为51 ku,以包涵体的形式表达,具有较强的反应原性。间接ELISA法检测结果表明,重组蛋白CatL1D免疫小鼠血清抗体效价可达1∶102 400,证实其具有良好的免疫原性。【结论】Fh重组蛋白CatL1D具有较强的抗原性,有开发为早期诊断抗原和亚单位疫苗的潜力。
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| 关 键 词： | 肝片吸虫 组织蛋白酶L1D 分子特征 免疫原性 |
| 收稿时间： | 2018/3/8 0:00:00 |
Immunogenicity of CatL1D protein in Fasciola hepatica |
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| WANG Xifeng,MENG Qingling and QIAO Jun,et al.Immunogenicity of CatL1D protein in Fasciola hepatica[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2019,47(5):1-6. |
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| Authors: | WANG Xifeng MENG Qingling and QIAO Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Fasciola hepatica CathepsinL1D molecular characteristics immunogenicity |
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