| 牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶 |
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| 引用本文： | 黄晓静,李 睿,马红芳,等.牛IgG2 Fc受体的真核表达、纯化与结晶[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2019,47(8):1-7. |
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| 作者姓名： | 黄晓静 李 睿 马红芳 等 |
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| 作者单位： | 河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室;扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 |
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| 基金项目： | 河南省自然科学基金重点项目（182300410001）;河南省农业科学院科研发展专项资金项目（豫财预［2017］76-22，20188118） |
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| 摘 要： | 【目的】制备牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)蛋白并分析其结构与生物学功能,为进一步研究其免疫学功能奠定基础。【方法】PCR扩增boFcγ2R的胞外区基因片段,将其克隆至真核表达载体pMT/BiP/V5-His A构建重组pMT/BiP-boFcγ2R-His质粒,利用果蝇胚胎Drosophila Schneider 2(S2)细胞表达boFcγ2R胞外区重组蛋白,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,利用Dot-blot验证其生物学功能;采用蒸汽扩散坐滴法对目的蛋白进行结晶,对晶体进行X-ray衍射分析;利用去糖基化酶Endo Hf和PNGase F对目的蛋白进行处理,以验证其糖基化修饰与晶体无衍射之间是否存在因果关系。【结果】PCR扩增获得了663 bp的boFcγ2R基因胞外区片段。成功构建了pMT/BiP-boFcγ2R-His载体,将其转染S2细胞后诱导表达出26 ku的boFcγ2R胞外区重组蛋白。SDS-PAGE结果显示,通过镍柱亲和层析、凝胶过滤层析的纯化方法得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白;Dot-blot结果显示,该蛋白具有较好的生物学功能。蛋白结晶的2个条件是:体积分数15%Tacsimate~(TM)(pH 7.0)、0.1 mol/L HEPES (pH 7.0)、20 g/L PEG 3350和0.1 mol/L HEPES (pH 7.5)、250 g/L PEG 3350。蛋白初筛晶体无衍射,去糖基化试验验证了boFcγ2R胞外区蛋白初筛晶体无衍射可能与其糖基化有关的推测。【结论】得到了高纯度的boFcγ2R胞外区重组蛋白,获得其初筛晶体。
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| 关 键 词： | 牛IgG2 Fc受体 蛋白表达 蛋白结晶 |
| 收稿时间： | 2018/7/6 0:00:00 |
Expression,purification and preliminary crystallization of bovine IgG2 Fc receptor |
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| HUANG Xiaojing,LI Rui and MA Hongfang,et al.Expression,purification and preliminary crystallization of bovine IgG2 Fc receptor[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2019,47(8):1-7. |
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| Authors: | HUANG Xiaojing LI Rui and MA Hongfang |
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| Abstract: | |
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