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一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP)的建立与优化
引用本文:杜晓华,王得元,巩振辉.一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP)的建立与优化[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2006,34(9):45-49.
作者姓名:杜晓华  王得元  巩振辉
作者单位:1. 西北农林科技大学,园艺学院,陕西,杨凌,712100;广东省农业科学院,蔬菜研究所,广东省果蔬新技术研究重点实验室,广东,广州,510640
2. 广东省农业科学院,蔬菜研究所,广东省果蔬新技术研究重点实验室,广东,广州,510640
3. 西北农林科技大学,园艺学院,陕西,杨凌,712100
基金项目:广东省自然科学基金;广东省农业科学院基金
摘    要:为了避开基于限制性酶切位点分子标记技术的DNA酶切环节,简化其复杂的程序,试验以辣椒为材料,建立了一种新型DNA标记技术——限制性位点扩增多态性(RSAP),并对其反应体系进行了优化,对RSAP适用性、重复性进行了检验。结果显示,RSAP技术的引物为2条长度均为18 bp的引物,引物的3′端为4~6个碱基的限制性酶切位点序列,接着是12~14个碱基的随机序列,2条引物的限制性位点和随机序列不同;PCR扩增的前5个循环采用35℃的退火温度,随后的35个循环采用48℃的退火温度;在25μL反应体系中,模板DNA用量为20 ng,M g2+浓度为2.5 mm o l/L,dNTP s浓度为0.2 mm o l/L,T aq DNA聚合酶用量为1.5 U,2条引物浓度均为600 nm o l/L;RSAP技术重复性好,适用性广泛,是一种操作简便、产率中等、稳定可靠的DNA标记技术。

关 键 词:限制性位点扩增多态性  DNA标记技术  蔬菜育种
文章编号:1671-9387(2006)09-0045-05
收稿时间:2006-03-16
修稿时间:2006-03-16

Development and refinement of a new marker technique Restriction site amplified polymorphism (RSAP)
DU Xiao-hua,WANG De-yuan,GONG Zhen-hui.Development and refinement of a new marker technique Restriction site amplified polymorphism (RSAP)[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2006,34(9):45-49.
Authors:DU Xiao-hua  WANG De-yuan  GONG Zhen-hui
Institution:1 (1 College of Horticulture,Northwest A & F University,Yangling,Shaanxi 712100,China; 2 Vegetable Institute,Guangdong Key Biotech Lab for Fruits and Vegetables,Guangdong Academy of Agricultural Sciences,Guangzhou,Guangdong 510640,China)
Abstract:
Keywords:restriction site amplified polymorphism  DNA marker technique  vegetable breeding
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