| 利用CMV启动子构建PRRSV感染性克隆的研究 |
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| 引用本文： | 徐彦召,王 青,胡建和,等.利用CMV启动子构建PRRSV感染性克隆的研究[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2016,44(7):50-56,63. |
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| 作者姓名： | 徐彦召 王 青 胡建和 等 |
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| 作者单位： | 河南科技学院 动物科学学院,河南科技学院 动物科学学院,河南科技学院 动物科学学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31402208)；河南省科技攻关项目（162102110037） |
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| 摘 要： | 【目的】建立一种利用CMV启动子获得拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的方法,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒提供操作平台。【方法】根据PRRSV的基因序列特征和CMV启动子的序列特征,对pBluescprictⅡSK(+)载体进行多克隆序列改造;设计特异性引物,分6段扩增、组装出PRRSV的全长cDNA并扩增CMV真核启动子序列;采用酶切、连接、转化等方法将连接成功病毒的全长cDNA置于CMV真核启动子序列的下游,获得含有CMV启动子和猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株全长cDNA克隆的重组质粒pSK-CH-1A;再将重组质粒直接转染MARC-145宿主细胞,得到猪繁殖与呼吸综合征病毒CH-1A株病毒的拯救病毒。【结果】成功获得了19 112bp含CH-1A全长cDNA的pSK-CH-1A载体,将其直接转染MARC-145宿主细胞后,经细胞体内转录合成病毒基因组RNA,获得了拯救病毒(rCH-1A);病毒生长特性试验结果显示,拯救病毒与亲本病毒在MARC-145细胞上具有相似的增殖特性,且拯救病毒序列含有不同于亲本病毒的分子标记MluⅠ酶切位点。【结论】建立了一种方法简单,操作方便,节约时间和成本的PRRSV感染性cDNA克隆的体外拯救方法。
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 CMV启动子 感染性克隆 |
| 收稿时间： | 2014/11/1 0:00:00 |
Construction of infectious clone of porcine reproductive and respiratory syndrome virus using CMV promoter |
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| XU Yanzhao,WANG Qing and HU Jianhe,et al.Construction of infectious clone of porcine reproductive and respiratory syndrome virus using CMV promoter[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2016,44(7):50-56,63. |
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| Authors: | XU Yanzhao WANG Qing and HU Jianhe |
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