奶山羊LXRα基因shRNA序列的筛选及腺病毒载体的构建与鉴定 |
| |
引用本文: | 钟 瑜,罗 军,王 维.奶山羊LXRα基因shRNA序列的筛选及腺病毒载体的构建与鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(11):41-47. |
| |
作者姓名: | 钟 瑜 罗 军 王 维 |
| |
作者单位: | 西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室;西北农林科技大学 动物科技学院,陕西省农业分子生物学重点实验室 |
| |
基金项目: | 农业部转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08009-162B) |
| |
摘 要: | 【目的】构建针对奶山羊肝脏X受体α(Liver X receptorα,LXRα)基因的干扰腺病毒载体。【方法】根据奶山羊LXRα基因CDS区域设计小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),分别构建pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA及pDsRed1/C1-LXRα载体,共转染HEK 293细胞,48h后观察其荧光蛋白表达量,筛选出具有明显干扰效应的shRNA。将具有明显干扰效应的shRNA载体与腺病毒骨架载体pAd/PL-DEST在LR ClonaseTMⅡ重组酶的作用下进行重组,经氨苄青霉素及氯霉素抗性筛选后获得重组腺病毒载体。将构建好的重组腺病毒载体经PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK 293细胞,培养7~10d后收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液,反复扩增3次后,获得高滴度的重组腺病毒,测定其病毒滴度。【结果】①设计出了shRNA-490、shRNA-496、shRNA-509和shRNA-923 4条shRNA序列;②得到shRNA-490和shRNA-923 2条具有明显干扰效应的shRNA;③获得pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA-490和pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA-923 2个重组腺病毒载体,ScaⅠ酶切及测序结果均正确,2个腺病毒重组载体滴度均为5×108 PFU/mL。【结论】奶山羊LXRα基因重组shRNA腺病毒载体构建成功,为利用RNA干扰技术研究LXRα基因在乳腺上皮细胞中的功能奠定了基础。
|
关 键 词: | 肝脏X受体α RNA干扰 腺病毒载体 奶山羊 |
收稿时间: | 2011/4/20 0:00:00 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《西北农林科技大学学报(社会科学版)》下载免费的PDF全文 |
|