| 大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 方 堃,白丁平,陈玉林.大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(11):35-40. |
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| 作者姓名： | 方 堃 白丁平 陈玉林 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院;西北农林科技大学 动物科技学院 |
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| 基金项目： | 农业部转基因生物新品种培育重大专项（2008ZX08008-002） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆大肠杆菌半胱氨酸合成酶(包括丝氨酸乙酰转移酶(cysE)和O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶(cysM))的基因,对其进行原核表达,并制备相应蛋白的抗体。【方法】用PCR方法从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增cysE和cysM基因,构建其原核表达载体pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM,对其进行BamHⅠ和SacⅠ双酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot(以His抗体作为一抗)检测。用纯化的cysE和cysM蛋白作为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价。【结果】PCR获得了822bp的cysE基因和912bp的cysM基因。原核表达质粒pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM构建成功,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的cysE和cysM重组蛋白分子质量分别为56和58ku。制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度均达到1∶102 400。【结论】成功克隆了大肠杆菌cysE和cysM基因,并实现了原核表达,同时制备出了相应的多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 丝氨酸乙酰转移酶基因 O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶基因 基因克隆 |
| 收稿时间： | 5/4/2011 12:00:00 AM |
Cloning, prokaryotic expression of Escherichia coli cysE,cysM and preparation of their antibodies |
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| FANG Kun,BAI Ding-ping,CHEN Yu-lin.Cloning, prokaryotic expression of Escherichia coli cysE,cysM and preparation of their antibodies[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(11):35-40. |
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| Authors: | FANG Kun BAI Ding-ping CHEN Yu-lin |
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| Institution: | FANG Kun,BAI Ding-ping,CHEN Yu-lin(College of Animal Science,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli cysE gene cysM gene gene cloning |
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