| 传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建 |
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| 引用本文： | 李守湖,范玉锋,高 欣,等.传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2018,46(5):37-42. |
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| 作者姓名： | 李守湖 范玉锋 高 欣 等 |
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| 作者单位： | 甘肃农业大学动物医学院;兰州威特森生物科技有限公司;兰州市渔业技术推广中心 |
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| 基金项目： | 甘肃省兰州市科技发展计划项目（2014-RC-69） |
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| 摘 要： | 【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒(IHNV)G基因,构建其重组腺病毒载体,为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因,将G基因插入到腺病毒穿梭载体中,再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组,构建重组腺病毒质粒,通过PCR扩增及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装,获得带有目的基因的重组腺病毒,通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒,用Western-blot法检测糖蛋白的表达,并测定重组腺病毒的TCID_(50)。【结果】成功克隆出IHNVG基因,其长度为1 533bp。成功构建了IHNV G蛋白重组腺病毒载体。GFP监测显示,重组腺病毒转染成功。重组腺病毒能在HEK-293细胞中表达出分子质量约58ku的产物,与预期相符,其TCID_(50)达到1.0×10~(10.4)mL~(-1)。【结论】成功构建了带有IHNVG基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒能高效表达,滴度较高。
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| 关 键 词： | 传染性造血器官坏死症 G基因 腺病毒载体 |
| 收稿时间： | 2017/2/10 0:00:00 |
Construction of recombinant adenovirus vector of infectious hematopoietic necrosis |
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| LI Shouhu,FAN Yufeng and GAO Xin,et al.Construction of recombinant adenovirus vector of infectious hematopoietic necrosis[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2018,46(5):37-42. |
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| Authors: | LI Shouhu FAN Yufeng and GAO Xin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | infectious hematopoietic necrosis G gene adenovirus vector |
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