| 泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 单黎然,杨 振,安 宁.泛素样小蛋白4(SUMO4)的克隆、原核表达、纯化及鉴定[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2008,36(9):11-16. |
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| 作者姓名： | 单黎然 杨 振 安 宁 |
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| 作者单位： | 陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西,杨凌,712100 |
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| 摘 要： | 【目的】为人类泛素样小蛋白4(SUMO4)多克隆抗体制备和疾病研究奠定基础。【方法】根据Gen-Bank提供的核酸序列,设计7条单链DNA,采用重叠延伸PCR方法,合成SUMO4基因编码区。基因片段经限制性内切酶双酶切,构建到表达载体pGEX-4T-1中。酶切、测序鉴定后,将重组子转染BL21 RIL菌株,表达及纯化融合蛋白。用SDS-PAGE和Western blot检测纯化效果,鉴定表达产物。【结果】成功合成了长度约为280 bp的SUMO4基因,经双酶切鉴定,SUMO4原核表达载体构建成功,插入片段测序正确。GST-SUMO4融合蛋白在终浓度1mmol/L IPTG、28℃诱导5 h后产量达到高峰,SDS-PAGE证实表达产物以可溶形式存在,分子量约为37 ku,GST亲和层析的纯化效果良好,Western blot验证融合蛋白分子量与预期值相符。【结论】SUMO4蛋白在大肠杆菌中高效表达,并以可溶性蛋白形式存在。
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| 关 键 词： | 人类泛素SUMO4 重叠延伸PCR 原核表达 蛋白纯化 |
| 收稿时间： | 2007/10/9 0:00:00 |
Cloning, prokaryotic expression, purification and identification of human small ubiquitin-related modifier 4 (SUM04) |
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| SHAN Li-ran,YANG Zhen,AN Ning,SONG Zhen,GUO Ze-kun.Cloning, prokaryotic expression, purification and identification of human small ubiquitin-related modifier 4 (SUM04)[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2008,36(9):11-16. |
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| Authors: | SHAN Li-ran YANG Zhen AN Ning SONG Zhen GUO Ze-kun |
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| Institution: | 1,2 (1 Shaanxi Key Laboratory of Molecular Biology for Agriculture,Yangling,Shaanxi 712100,China;2 College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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