弓形虫棒状体蛋白15的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

【目的】克隆弓形虫（Toxoplasma gondii）RH虫株速殖子的棒状体蛋白15(ROP15)基因，原核表达、纯化重组蛋白，并制备多克隆抗体。【方法】根据GenBank登录的弓形虫RH株ROP15(DQ096561.1)基因序列设计了1对引物，以提取的弓形虫RH虫株速殖子RNA为模板，通过RT-PCR获得该虫株的ROP15基因，将该基因连接至原核表达载体pGEX-4T-1上，获得重组质粒pGEX-4T-ROP15，测序结果与预期结果一致；转化BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导获得重组融合蛋白，运用亲和层析法纯化可溶性ROP15重组蛋白，SDS-PAGE对表达和纯化的目的蛋白进行分析。用纯化的ROP15重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体，运用Western blot分析特异性。【结果】成功克隆了弓形虫RH虫株速殖子ROP15基因，大小为924 bp；菌液PCR和酶切鉴定表明重组质粒pGEX-4T-ROP15构建成功，获得了约59 ku的可溶性融合蛋白表达产物；以纯化的可溶性ROP15重组表达蛋白为抗原制备兔源性抗血清，Western blot显示该多克隆抗体与ROP...