| 转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析 |
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| 引用本文： | 罗婵,屈春凤,李辉,雷钏,周宇,刘庆友,蒋建荣,石德顺.转人干扰素α-2b细胞株建立及其外源基因表达分析[J].广西农业科学,2015,46(5). |
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| 作者姓名： | 罗婵 屈春凤 李辉 雷钏 周宇 刘庆友 蒋建荣 石德顺 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学与技术学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 国家“863”计划项目 |
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| 摘 要： | 目的]从细胞水平探讨应用水牛乳腺生物反应器生产人干扰素α-2b(IFNα-2b)的可行性,为水牛乳腺生物反应器的制备提供参考依据.方法]建立并优化核转染人乳腺癌细胞Bcap-37的方法,再利用该方法将水牛乳腺特异性表达人IFNα-2b载体导入Bcap-37细胞,建立转基因细胞株,然后分别从RNA水平和蛋白质水平对其能否正常表达人IFNα-2b进行分析.结果]电压是影响Bcap-37细胞核转染效率的关键因素,对其进行优化(电压275 V、电击时间10 ms)后的核转染效率可达81.1％.使用优化后的核转染方法可将水牛乳腺特异性表达载体pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo成功转入Bcap-37细胞而获得转人IFNα-2b细胞株,经IFNα-2b基因的mRNA表达丰度及IFNα-2b蛋白的Western blotting检测,证实在两株转基因细胞系中均能顺利进行IFNα-26基因的转录与翻译.结论]建立的核转染法能高效转染Bcap-37细胞,可应用该方法在细胞水平上对携带人IFNα-2b基因水牛乳腺特异性表达载体的表达能力进行分析,并证实乳腺特异性表达载体(pBCN-IFN-CMV-EGFP-neo和pBCN-IFN-CMV-EGFP-IRES-neo)均能用于水牛乳腺生物反应器的制备.
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| 关 键 词： | 水牛 人干扰素 核转染 细胞株 表达分析 |
Establishment and exogenous genes expression analysis of cell strains secreted human interferon alpha 2b |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | buffalo human interferon nucleofection cell strains expression analysis |
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