| 陆地棉Ghuhrf1基因及其启动子的克隆与功能分析 |
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| 引用本文： | 杨江涛,王旭静,哈斯阿古拉,王志兴.陆地棉Ghuhrf1基因及其启动子的克隆与功能分析[J].中国农业科技导报,2020,22(6):17-25. |
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| 作者姓名： | 杨江涛 王旭静 哈斯阿古拉 王志兴 |
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| 作者单位： | 1.中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081；2.内蒙古大学生命科学学院，呼和浩特 010021） |
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| 基金项目： | 国家转基因生物新品种培育重大专项（2016zx08005 003）。 |
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| 摘 要： | 在分子育种过程中，优良基因和组织特异表达启动子的缺乏是制约棉花纤维品质改良的重要因素之一。分析转录组数据库中差异基因表达谱发现，Ghuhrf1为开花当天胚珠优势表达基因，推测该基因可能参与或调控棉纤维的合成。根据其EST序列设计引物，通过RACE技术获得Ghuhrf1基因的全长cDNA序列。荧光定量PCR分析表明，Ghuhrf1在开花当天的胚珠中显著表达。通过同源序列分析获得Ghuhrf1的上游启动子Ghuhrf1 Pro。Ghuhrf1 Pro全长为1 417 bp，含有GC box、CAAT box、CAT box、CCGTCC box和ACGT motif等顺式作用元件和组织特异性调控元件。根据组织特异性调控元件的分布位置构建了4个不同程度的缺失体转化烟草和拟南芥进行分析。GUS组织化学染色结果表明，全长启动子Pro和缺失体Pro1（-1 180～+226 bp）、Pro2(-867～+226 bp)、Pro3(-726～+226 bp)都能特异地驱动Gus基因在转基因拟南芥的叶片边缘尖部和莲座叶基部等分化生长旺盛部位表达，说明与分生组织表达相关的CAT box元件和CCGTCC box元件在启动子种子特异表达中起到重要的作用。同时，通过启动子缺失分析也表明，Ghuhrf1基因可能不是直接参与棉纤维的合成，而是间接的参与棉纤维原始细胞分化起始的调控。该结果为棉花纤维品质基因Ghuhrf1的功能研究提供了参考，并为棉花分子育种工程提供了新的调控元件。
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| 关 键 词： | Ghuhrf1基因 启动子 缺失分析 克隆 顺式作用元件 |
Cloning and Functional Analysis of Ghuhrf1 Gene and Promoter from Gossypium hirsutum |
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| YANG Jiangtao,WANG Xujing,HASI Agula,WANG Zhixing.Cloning and Functional Analysis of Ghuhrf1 Gene and Promoter from Gossypium hirsutum[J].Journal of Agricultural Science and Technology,2020,22(6):17-25. |
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| Authors: | YANG Jiangtao WANG Xujing HASI Agula WANG Zhixing |
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