刺参耐寒基因筛选cDNA文库的构建与分析

利用抑制性消减杂交(Suppression subtractive hybridization,SSH)技术,对刺参Apostichopus japonicus耐低温性状相关的基因进行研究。通过对刺参进行低温骤降试验,利用SSH技术构建刺参低温骤降双向消减cDNA文库,共获得6 800个阳性克隆,从文库中随机挑取1 000个阳性克隆测序,共获得680条有效EST序列。利用Blastx软件将测序结果与GenBank数据库进行比对,结果显示:72个克隆与已知基因高度同源,其中有6个基因与应激和免疫反应相关,存在于正向文库的有4个,分别为铁蛋白、溶菌酶、类似紫海胆冷诱导β-RNA结合蛋白和huadl3021索转铁蛋白,存在于反向文库的有2个,分别为热休克同源蛋白70和热休克蛋白gp96;有3个基因与营养代谢和运输相关,且都存在于反向文库,分别为主要卵黄蛋白1、主要卵黄蛋白2和胰淀粉酶。研究表明,刺参低温骤降文库的成功构建对阐述其耐低温分子机制有非常重要的意义,为刺参育种和生物学研究提供了新的资料。