| 尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定 |
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| 引用本文： | 罗国玲,王孝谦,简纪常,鲁义善,汤菊芬,黄瑜.尼罗罗非鱼CD209基因的克隆、表达及功能鉴定[J].大连海洋大学学报,2021,36(3):374-382. |
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| 作者姓名： | 罗国玲 王孝谦 简纪常 鲁义善 汤菊芬 黄瑜 |
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| 作者单位： | 广东海洋大学 水产学院, 广东 湛江524088;广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室, 广东 湛江 524088;水产经济动物病害控制广东省普通高等学校重点实验室, 广东 湛江524088;广东海洋大学 水产学院, 广东 湛江524088 |
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| 摘 要： | 为揭示尼罗罗非鱼模式识别受体CD209的分子结构、组织表达特性并初步了解其免疫功能, 利用聚合酶链式反应 (PCR) 获得尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus (体质量为100 g±5 g) CD209基因的开放阅读框片段 (open reading frame, ORF), 命名为OnCD209; 使用生物信息学软件对其氨基酸序列进行分析,采用RT-qPCR法对健康尼罗罗非鱼的各组织及无乳链球菌刺激后尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、鳃和肠道的CD209基因表达量进行分析, 并构建了CD209-pEGFP-N1及CD209-pcDNA3. 1载体, 研究了CD209基因在293T细胞中的定位及在细胞中过表达时对NF-κB酶活性的影响.结果表明: OnCD209的ORF区片段长度为1 383 bp, 可编码460个氨基酸, 预测该蛋白具有一个C型凝集素结构域; 多重氨基酸序列比对及系统进化分析显示, CD209氨基酸序列在各物种间相对不保守, 尼罗罗非鱼与田纹狮子鱼Liparis tanakae的CD209氨基酸序列聚为一支, 亲缘关系最近; RT-qPCR结果显示, 所有组织 (脑、血液、皮肤、肌肉、头肾、肠道、鳃、肝脏、脾脏和胸腺) 中均能检测到OnCD209的mRNA表达, 且在血液中表达量最高; 尼罗罗非鱼在受到无乳链球菌感染后, OnCD209的表达在各组织中呈现相似的变化趋势, 大致呈先在6 h时上调, 后在12、 24 h时下调, 再在48 h后上调的表达模式; 亚细胞定位分析显示, OnCD209定位于细胞膜上; 双荧光素酶报告基因系统检测发现, OnCD209对NF-κB通路的活性显著性激活.研究表明, On-CD209可能参与尼罗罗非鱼对细菌的免疫应答过程及炎症反应过程.
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| 关 键 词： | 尼罗罗非鱼 模式识别受体 荧光定量PCR 基因克隆 亚细胞定位 NF-κB |
Cloning,expression and functional identification of CD209 gene in Nile tilapia Oreochromis niloticus |
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| Authors: | LUO Guoling WANG Xiaoqian JIAN Jichang LU Yishan TANG Jufen HUANG Yu |
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