泥鳅MSAP技术反应体系的建立及优化 |
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引用本文: | 周贺,徐雯,李雅娟,秦艳杰,李霞,麻天宇,肖逸啸,马海艳.泥鳅MSAP技术反应体系的建立及优化[J].大连海洋大学学报,2014(6). |
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作者姓名: | 周贺 徐雯 李雅娟 秦艳杰 李霞 麻天宇 肖逸啸 马海艳 |
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作者单位: | 大连海洋大学 辽宁省海洋生物资源恢复与生境修复重点实验室,辽宁 大连,116023 |
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基金项目: | 国家自然科学基金资助项目,大连海洋大学博士启动基金资助项目 |
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摘 要: | 为获得不同倍性泥鳅基因组DNA甲基化水平及模式,以泥鳅Misgurnus anguillicaudatus为研究对象,利用正交试验建立了甲基化敏感扩增多态性( MSAP)方法的反应体系,并利用该方法对二倍体泥鳅鳍基因组DNA进行了MSAP分析。结果表明:最佳双酶切反应体系为800 ng的泥鳅基因组DNA,用EcoR I、 Hpa II和Msp I各10 U,在37℃下反应8 h后即可酶切;最佳预扩增反应体系为模板4μL、预扩增引物0·8μL、0·2 mmol/L dNTPs、1·5 mmol/L Mg2+和 Taq 1 U;最佳选择性扩增反应体系为预扩增产物稀释20倍的模板2μL、引物1·5μL、0·375 mmol/L dNTPs、1·5 mmol/L Mg2+和 Taq 1 U;二倍体泥鳅全甲基化率分别为24·1%、20·8%、22·3%,半甲基化率分别41·4%、20·8%、33·3%,总甲基化率分别为65·5%、41·6%、55·6%。研究表明,该反应体系稳定、可靠、重复性好,为MSAP技术在多倍体泥鳅相关研究中的应用奠定了基础。
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关 键 词: | 泥鳅 DNA甲基化 甲基化敏感扩增多态性 ( MSAP) 反应体系 |
Establishment and optimization of MSAP reaction system for loach Misgurnus anguillicaudatus |
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Authors: | ZHOU He XU Wen LI Ya-juan QIN Yan-jie LI Xia MA Tian-yu XIAO Yi-xiao MA Hai-yan |
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Abstract: | |
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Keywords: | Misgurnus anguillicaudatus DNA methylation methylation sensitive amplification polymorphism ( MSAP) reaction system |
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