柑橘黄龙病早期诊断的PCR检测技术优化 |
| |
引用本文: | 董宏图,王晓冬,侯佩臣,罗斌,李爱学,张晗.柑橘黄龙病早期诊断的PCR检测技术优化[J].浙江农业科学,2021,62(4):750-754. |
| |
作者姓名: | 董宏图 王晓冬 侯佩臣 罗斌 李爱学 张晗 |
| |
作者单位: | 1.北京农业信息技术研究中心,北京 1000942.北京农业智能装备技术研究中心,北京 100094 |
| |
基金项目: | 广东省重点领域研发计划 “精准农业”(2019B020214005) |
| |
摘 要: | 柑橘黄龙病是柑橘属植物主要病害之一,是由一种限于韧皮部内寄生的革兰氏阴性细菌引起的病害,病菌可随筛管转运至整个植株,其潜伏周期长、危害面积广,严重威胁我国乃至世界范围内柑橘产业的健康发展。因此,早期柑橘黄龙病的快速检测是病害防治重要环节,目前最常用的是基于PCR技术的检测方法,但由于植株体内的病菌含量较低、PCR扩增体系中引物稳定性的差异、DNA模板浓度的不同均会对扩增效果有较大影响。本研究以感染黄龙病的柑橘叶片作为样本,提取叶片DNA作为模板。利用LSS606/LAS、16sf/16sr、A2/J5、P1/P2和OI1/OI2 5对柑橘黄龙病检测引物对PCR反应体系进行了优化。结果显示,除了OI1/OI2引物的特异性较差外,其余4种引物均表现了很好的特异性,引物浓度在0.2~0.3 μmol时,PCR扩增效果较好。灵敏度检测显示引物LSS606/LAS、A2/J5对模板DNA的灵敏度较高,在模板浓度为0.048 ng·μL-1时仍能扩增出目标产物,分别是引物16sf/16sr和P1/P2检测灵敏度的10倍和20倍,可检测出1 ng总DNA中的柑橘黄龙病菌数在426~755。该研究通过特异性引物的筛选以及PCR检测体系的优化,确定了一种快速准确检测柑橘黄龙病的方法,为柑橘黄龙病的早期诊断奠定基础。
|
关 键 词: | 黄龙病 引物 PCR 灵敏度 特异性 |
收稿时间: | 2021-02-18 |
本文献已被 CNKI 等数据库收录! |
| 点击此处可从《浙江农业科学》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《浙江农业科学》下载免费的PDF全文 |
|