| 黄藤ISSR反应体系的条件优化 |
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| 引用本文： | 杨华,宋绪忠,尹光天,白嘉雨,甘四明.黄藤ISSR反应体系的条件优化[J].福建林学院学报,2006,26(2):152-155. |
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| 作者姓名： | 杨华 宋绪忠 尹光天 白嘉雨 甘四明 |
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| 作者单位： | 1. 浙江省林业科学研究院,浙江,杭州,310023
2. 中国林业科学研究院热带林业研究所,广东,广州,510520 |
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| 摘 要： | 在利用ISSR技术对黄藤进行分子生物学研究过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素,如模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及退火温度等指标进行筛选和优化,获得用于黄藤ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20μLPCR反应体积中含有1×缓冲液,20 ng模板DNA,2 mmol.L-1MgC l2,100μmol.L-1dNTP,1.5 U TaqDNA聚合酶,0.4μmol.L-1引物,2%甲酰胺,0.5 mmol.L-1亚精胺.扩增程序为:94℃预变性5 m in;再35个循环:94℃30 s,52℃45 s和72℃1.5 m in;最后72℃延伸7 m in.
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| 关 键 词： | 黄藤 ISSR 优化 |
| 文章编号： | 1001-389X（2006）02-0152-04 |
| 收稿时间： | 2006-01-10 |
| 修稿时间： | 2006-03-20 |
Optimization of ISSR reaction system for Daemonorops margaritae |
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| YANG Hua,SONG Xu-zhong,YIN Guang-tian,BAI Jia-yu,GAN Si-ming.Optimization of ISSR reaction system for Daemonorops margaritae[J].Journal of Fujian College of Forestry,2006,26(2):152-155. |
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| Authors: | YANG Hua SONG Xu-zhong YIN Guang-tian BAI Jia-yu GAN Si-ming |
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| Abstract: | This paper studied the effecting factors in Daemonorops margaritae (Hence) Beccari ISSR analysis.These factors(included) template DNA concentration,Mg~2+ concentration,dNTPs concentration,Taq DNA polymerase concentration,primer concentration,and annealing temperature.The optimized conditions for D.margaritae ISSR-PCR reaction were as follows:1×Taq buffer,20 ng template DNA,2 mmol·L~-1 MgCl_2,100 μmol·L~-1 dNTPs,1.5 U Taq DNA polymerase,0.4 μmol·L~1 primer,2% formamide and 0.5 mmol·L~-1 sperminide.The amplification cycling was 1 cycle at 94 ℃ for 5 min;35 cycles at 94 ℃ for 30 sec,52 ℃ for 45 sec,and 72 ℃ for 1.5 min respectively;and 1 cycle at 72 ℃ for 7 min. |
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| Keywords: | Daemonorops margaritae inter-simple sequence repeats optimization |
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