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大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测
引用本文:于今非,李明鸿,谢琴,刘庆友,石德顺.大鼠OSP-1启动子克隆与表达检测[J].安徽农业科学,2010,38(24):13190-13192,13202.
作者姓名:于今非  李明鸿  谢琴  刘庆友  石德顺
作者单位:广西大学动物繁殖研究所,广西南宁,530005
基金项目:农业部转基因生物新品种培育重大专项 
摘    要:目的]克隆大鼠卵巢特异性启动子(OSP-1)片段,并在细胞水平检测该启动子调控标记基因的组织特异性表达。方法]参考已知大鼠OSP-1序列设计特异性引物,PcR扩增大鼠OSP-1启动子片段并与已公布的大鼠OSP—1序列进行比较。将OSP-1启动子定向克隆到去除CMV的pEGFP—N1载体,构建真核表达载体pOSP—1—EGFP.N1;重组质粒在脂质体LipofectamineTM2000介导下,分别转染水牛的颗粒细胞、乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞,并于转染后12,24和48h在荧光显微镜下观察EGFP表达情况。【结果lOSP—l启动子扩增片段长480bp,与已公布的大鼠OSP-1序列的相似性达96%;应用启动子预测软件对所得序列分析表明,该扩增片段含有类似于TA—TAbox和CAATbox的核心启动顺式元件,并含有多个C/EBPbeta转录因子的结合位点;在颗粒细胞转染后12h可观测到绿色荧光表达,转染后24h荧光细胞增多,细胞形态均呈圆形、体积较大,48h荧光细胞数量骤减,且死细胞增多;在乳腺上皮细胞和胎儿成纤维细胞均未检测到EGFP基因表达。结论]大鼠OSP-1启动子控制下的EGFP基因可在水牛颗粒细胞中特异表达,为构建水牛卵巢特并性表达转基因载体奠定了基础。

关 键 词:OSP-1启动子  水牛  卵巢特异表达

Cloning and Expression Assay of Ovarian-specific Promoter in Rats
Institution:YU Jin-fei et al (Animal Reproduction Institute, Guangxi University, Nanning, Guangxi 530005)
Abstract:
Keywords:OSP-1 promoter  Buffalo  Ovarian-specific expression
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