人雌激素相关受体α配体结合域的原核表达载体构建·表达及鉴定

目的]构建舍人雌激素相关受体α配体结合域区段的原核表达载体，并在大肠杆菌表达系统中表达。方法]用Trizol试剂提取人肺腺癌A549细胞总RNA，逆转录为cDNA；应用PCR扩增人EERα—LBD基因片段，插入表达载体pET-30a-c（＋）中；转化大肠杆菌BL21（DE3）PLysS，经IPTG诱导后表达并鉴定。结果]应用PCR方法扩增出约687bp的基因片段，酶切、纯化、连接至载体后，经测序与GenBank中的一致，表达蛋白相对分子质量约32kD，纯化后用生物大分子相互作用系统鉴定为目的蛋白。结论]已成功获得人EERα-LBD融合蛋白，为进一步的研究和应用奠定了基础。