烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein, CP)基因保守序列设计引物及探针，通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析，建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。结果]该方法特异性好，与其他常见的烟草病毒无交叉反应；灵敏度高，检测下限可达到4.53×10¹ copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍；建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R²)为0.993 3,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好，重复性试验结果可靠。结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品，检测结果一致，进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。