| 茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立 |
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| 引用本文： | 杜传来,罗海波,彭昕,王韦华,郁志芳.茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立[J].南方农业学报,2016(3):332-336. |
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| 作者姓名： | 杜传来 罗海波 彭昕 王韦华 郁志芳 |
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| 作者单位： | 1. 安徽科技学院 食品药品学院,安徽 凤阳,233100;2. 浙江医药高等专科学校食品学院,浙江宁波,315100;3. 南京农业大学 食品科技学院,南京,210095 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31401612)，浙江省自然科学基金项目(LY14C200005) |
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| 摘 要： | 【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。【结果】差速离心(3000~14000×g)联合Percoll不连续密度梯度离心(20%∶24%∶40%=2∶4∶2)对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p H 3~10的IPG胶条,1.0 mg上样量,12%SDS-PAGE进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p H 4~8范围内,p H 3~4和p H 8~10范围内蛋白点较少;进一步选用p H 4~7和p H 5~8的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p H 4~7范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。分别采用0.8、1.0和1.2 mg 3个不同的上样量进行双向电泳,结果表明上样量为1.0 mg时,电泳图谱质量最好。【结论】通过差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心提取纯化茭白线粒体,并控制好双向电泳体系的p H范围、上样量等因素,可获得蛋白质点清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。
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| 关 键 词： | 茭白 线粒体 双向电泳 蛋白质组学 |
Establishment of two-dimensional electrophoresis system for mitochondrial proteins of Zizania latifolia |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Zizania latifolia mitochondria two-dimensional electrophoresis (2-DE) proteomics |
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