| 三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达 |
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| 引用本文： | 曹艳杰,何怡宁,唐宁,王海勇,张志鹏,谢智文,韦平,韦天超,磨美兰.三黄鸡STING胞外区基因克隆及原核表达[J].南方农业学报,2016(8):1401-1405. |
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| 作者姓名： | 曹艳杰 何怡宁 唐宁 王海勇 张志鹏 谢智文 韦平 韦天超 磨美兰 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院,南宁,530005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31360611)，广西自然科学基金项目(2014GXNSFDA118011 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆鸡干扰素基因刺激蛋白(STING)胞外区基因并进行原核表达,为了解STING蛋白的生物学功能及探讨禽类的固有免疫机制打下基础。【方法】采用RT-PCR扩增鸡STING胞外区基因,与原核表达载体p GEX-4T-1连接构建重组表达质粒,再转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后进行12%SDS-PAGE和Western blotting鉴定分析。【结果】三黄鸡STING胞外区基因全长951 bp,与原核表达载体p GEX-4T-1可成功构建重组表达质粒p GEX-4T-1-STING,转化BL21(DE3)感受态细胞后经1.0 mmol/L IPTG诱导表达4 h,12%SDS-PAGE电泳检测得到一个带GST标签约62 ku的融合蛋白,采用抗GST多克隆抗体进行Western blotting鉴定,约在62 ku处可见一条明显的蛋白印迹条带,表明目的蛋白原核表达正确,且特异性较高。【结论】从三黄鸡外周血淋巴细胞中克隆获得的STING胞外区基因片段可在原核细胞中高效表达,且纯化后的融合蛋白可用于制备鸡STING多克隆抗体。
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| 关 键 词： | 三黄鸡 干扰素基因刺激蛋白(STING) 克隆 原核表达 |
Cloning and prokaryotic expression of Sanhuang chicken STING extracellular domain gene |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Sanhuang chicken stimulator of interferon genes (STING) cloning prokaryotic expression |
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