| 橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 贺永国,李哲,黄绵佳,曾宪海,林位夫,刘洁琼,张春红,马晓晓.橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体构建与鉴定[J].南方农业学报,2016(2):163-168. |
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| 作者姓名： | 贺永国 李哲 黄绵佳 曾宪海 林位夫 刘洁琼 张春红 马晓晓 |
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| 作者单位： | 1. 海南大学园艺园林学院,海口,570228;2. 中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室,海南儋州,571737;3. 海南大学农学院,海口,570228 |
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| 基金项目： | 中国热带农业科学院基本科研业务费专项项目(1630022013029) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆橡胶树乳管特异性强启动子HEV2.1(PHEV2.1),构建天然橡胶生物合成途径关键限速酶基因(Hb HMGR1)的乳管特异性植物表达载体,为橡胶树遗传转化奠定基础。【方法】根据已报道的HEV2.1序列(Gen Bank登录号AY247789.1)设计1对特异引物,采用PCR从橡胶树热研7-33-97基因组DNA中克隆PHEV2.1,与Hb HMGR1基因融合构建橡胶树乳管特异性植物表达载体,并以PCR和限制性内切酶酶切进行鉴定。【结果】用特异引物可从热研7-33-97基因组DNA中扩增获得1852 bp的PHEV2.1片段,其与AY247789.1启动子序列的同源性为98.6%。将PHEV2.1与Hb HMGR1基因融合构建乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1,经PCR和限制性内切酶酶切鉴定证明植物表达载体构建成功。【结论】将PHEV2.1和Hb HMGR1基因先构建到p CAMBIA3301载体上再克隆至p CAMBIA2301载体上,能有效解决直接克隆至p CAMBIA2301载体上出现Pst I突变、阻碍载体构建的难题,成功构建获得乳管特异性植物表达载体p CAMBIA2301-PHEV2.1-Hb HMGR1。
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| 关 键 词： | 橡胶树 乳管特异性启动子PHEV2.1 HbHMGR1基因 植物表达载体 构建 鉴定 |
Construction and identification of binary vector containing HbHMGR1 gene from laticifer of Hevea brasiliensis |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | H brasiliensis laticifer specific promoter PHEV2 1 HbHMGR1 gene plant expression vector construction identification |
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