| 鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 谢志勤,谢芝勋,邓显文,谢丽基,范晴,罗思思,黄莉,黄娇玲,张艳芳,王盛,刘加波,庞耀珊,梁亮,冯务玲.鸡新城疫病毒和禽肺炎病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用[J].南方农业学报,2017,48(3). |
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| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 邓显文 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 张艳芳 王盛 刘加波 庞耀珊 梁亮 冯务玲 |
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| 作者单位： | 1. 广西兽医研究所/广西动物疫病病原生物学与诊断重点实验室,南宁,530001;2. 南宁市良凤农牧有限责任公司,南宁,530031 |
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| 基金项目： | 国家"万人计划"领军人才专项项目，广西科技重点研发计划项目，南宁市科学研究与技术开发计划项目 |
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| 摘 要： | 【目的】建立一次性可同时扩增鉴别鸡新城疫病毒(NDV)和禽肺炎病毒(APV)的二重RT-PCR,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供技术支持。【方法】根据Gen Bank已发表NDV的F基因序列(Gen Bank登录号JX840454)和APV的F基因序列(Gene Bank登录号AF187154)分别设计2对特异性引物,应用这2对引物建立可同时检测鉴别NDV和APV的二重RT-PCR,对扩增条件进行优化,并通过特异性试验、敏感性试验和临床样品检测等验证其实用性。【结果】优化后的二重RT-PCR可特异性扩增出参试NDV毒株(La Sota株、F48E9株、I株)及APV/MN-10毒株的目的条带,其大小分别为247和424 bp,而其他对照参试毒株在247和424 bp处均无特异条带出现。二重RT-PCR针对NDV和APV的最低检出限均为10 pg的RNA。应用建立的二重RT-PCR对132份从广西采集的病鸡样品进行检测,结果得到NDV阳性样品26份、APV阳性样品2份,与血清学方法的鉴定结果一致。随机选取的2份NDV阳性PCR产物与NDV(Gen Bank登录号JX840454)的F基因序列一致,同源性达100%;2份APV阳性PCR产物与APV(Gen Bank登录号AF187154)的F基因序列也完全一致,同源性达100%。【结论】针对NDV和APV建立的二重RT-PCR具有特异性好、灵敏度高、简便快速的特点,可用于临床快速鉴别诊断,为有效防控鸡新城疫和禽肺炎病毒病提供了技术支持。
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| 关 键 词： | 鸡新城疫病毒(NDV) 禽肺炎病毒(APV) 二重RT-PCR 检测 |
Establishment and application of duplex RT-PCR detection for Newcastle disease virus and avian pneumovirus |
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| XIE Zhi-qin,XIE Zhi-xun,DENG Xian-wen,XIE Li-ji,FAN Qing,LUO Si-si,HUANG Li,HUANG Jiao-ling,ZHANG Yan-fang,WANG Sheng,LIU Jia-bo,PANG Yao-shan,LIANG Liang,FENG Wu-ling.Establishment and application of duplex RT-PCR detection for Newcastle disease virus and avian pneumovirus[J].Journal of Southern Agriculture,2017,48(3). |
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| Authors: | XIE Zhi-qin XIE Zhi-xun DENG Xian-wen XIE Li-ji FAN Qing LUO Si-si HUANG Li HUANG Jiao-ling ZHANG Yan-fang WANG Sheng LIU Jia-bo PANG Yao-shan LIANG Liang FENG Wu-ling |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Newcastle disease virus(NDV) avian pneumovirus(APV) duplex RT-PCR detection |
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