长牡蛎钙调蛋白基因克隆及多态性分析

【目的】从钙调蛋白（CaM）基因克隆和序列分析入手，对长牡蛎CaM基因的功能进行深入研究，为生产实践提供参考依据。【方法】利用SMART RACE和EPIC-PCR技术克隆长牡蛎CaM基因，然后采用PCR-SSCP技术和DNA测序方法分析长牡蛎CaM基因编码区多态性。【结果】扩增获得长牡蛎CaM基因cDNA全长序列为917 bp，包括开放阅读框（ORF）全长450 bp，编码149个氨基酸；5'非编码区含222 bp，3'非编码区含245 bp；ORF内有3段内含子序列，分别为Intron-1：110 bp、Intron-2：137 bp和Intron-3：143 bp。PCR-SSCP分析获得C5引物野生型TT型、突变型GG型和杂合型GT型3种基因型。基因型和等位基因频率统计结果表明，GG型和G等位基因频率明显高于TT型和T等位基因；而最小二乘分析结果表明，CaM基因位于ORF内第158位T→G的SNPs位点，对长牡蛎的壳重有显著性影响（P＜0.05），但对壳长、壳高、壳宽、体总重及肉重无显著影响。【结论】CaM基因对长牡蛎贝壳形成具有一定的影响作用。