| 牛分枝杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 谢志勤,谢芝勋,刘加波,庞耀珊,邓显文,谢丽基,彭宜,范晴,牟群,莫文胜.牛分枝杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立[J].南方农业学报,2012,43(10):1584-1589. |
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| 作者姓名： | 谢志勤 谢芝勋 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 彭宜 范晴 牟群 莫文胜 |
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| 作者单位： | 广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室;桂林市动物疫病预防诊断中心;永福县动物疫病预防诊断中心 |
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| 基金项目： | 新世纪百千万人才工程国家级人选专项基金项目(945200603);公益性行业(农业)科研专项项目(201103008);广西特聘专家专项经费资助项目(2011B020);广西科技攻关项目(桂科转0626001-5-1);广西水产畜牧局科研计划项目(桂渔牧科08283-20,桂渔牧科09254-18) |
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| 摘 要： | 【目的】建立一种检测牛分枝杆菌的SYBR Green I 实时荧光定量PCR，为防控牛结核病提供技术支持。【方法】根据牛分枝杆菌特异性基因序列（No. MBU87961，gi9954088）设计合成一对扩增牛分枝杆菌的特异性引物，从引物设计、各成分配比、样品采集及样品DNA提取等方面进行优化，并对建立的方法进行标准曲线、溶解曲线分析及特异性、敏感性、重复性、临床样品检验试验。【结果】牛分枝杆菌SYBR Green I实时荧光定量PCR的检测模板范围为1.0×109～1.0×10拷贝/μL时，其标准曲线呈良好的线性关系，溶解曲线表现为单一波峰，Tm值为86.48～86.65℃。SYBR Green I实时荧光定量PCR的牛型分枝杆菌扩增结果为阳性，其他参试菌株均为阴性；可检测出10拷贝/μL的牛分枝杆菌DNA，敏感性是常规PCR的100倍；Ct值变异系数小于5%，重复性好；对50份PPD检测为阳性的牛鼻黏液、牛奶和淋巴结进行检测，其结果与常规PCR检测结果一致。【结论】建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR具有快速、便捷、准确等优点，适合于牛分枝杆菌的鉴别诊断。
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| 关 键 词： | 牛结核病 牛分枝杆菌 SYBR Green I实时荧光定量PCR 检测 |
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