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烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化
引用本文:潘滨,吴建祥,李桂新,周雪平.烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化[J].浙江大学学报(农业与生命科学版),2007,33(1):24-28.
作者姓名:潘滨  吴建祥  李桂新  周雪平
作者单位:浙江大学,生物技术研究所,浙江,杭州,310029
摘    要:    为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus, TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein, Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.结果表明,大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3 h后,使用终浓度为0.5 mmol·L-1的IPTG在28℃诱导培养4 h时,GST-Rep融合蛋白表达量最高,表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42%以上.用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66 kD,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应.Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下了基础.

关 键 词:Q786烟草曲茎病毒  复制相关蛋白  原核表达
文章编号:1008-9209(2007)01-0024-05
修稿时间:2006-04-17

Optimization of prokaryotic expression of Tobacco curly shoot virus replication-associated protein gene
PAN Bin,WU Jian-xiang,LI Gui-xin,ZHOU Xue-ping.Optimization of prokaryotic expression of Tobacco curly shoot virus replication-associated protein gene[J].Journal of Zhejiang University(Agriculture & Life Sciences),2007,33(1):24-28.
Authors:PAN Bin  WU Jian-xiang  LI Gui-xin  ZHOU Xue-ping
Institution:Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310029. China
Abstract:
Keywords:Tobacco curly shoot virus  replication-associated protein  prokaryotic expression  
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