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| 甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶SeCDA2a的外源表达及酶活力测定 | |
| 摘 要： | 【目的】为了研究甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶Se CDA2a的酶学性质,探索其对甜菜夜蛾幼虫发育过程的影响,为甜菜夜蛾的生物防治提供新靶标.【方法】以p MD19GTGSecda2a重组质粒为模板,PCR扩增得到SecG da2a基因.构建原核表达载体p ETG28aGSecda2a,IPTG诱导蛋白表达.利用BacGtoGBac杆状病毒表达系统,构建重组转座载体p Fast Bc Ha T AGSecda2a,脂质体转染昆虫细胞Sf9,Westernblot对Se CDA2a重组蛋白进行分析,以对硝基苯胺为底物利用分光光度计测定其酶活力.【结果】Secda2a在大肠杆菌和Sf9中均成功表达61k Da的重组蛋白,与预测分子量大小相符.IPTG终浓度为0.50mmol/L、37℃诱导培养4h时蛋白表达量最高.昆虫细胞Sf9表达的重组蛋白Se CDA2a的酶活力是1.57U/m L.【结论】本研究实现甜菜夜蛾几丁质脱乙酰酶基因Secda2a的外源表达,测定重组蛋白Se CDA2a的酶活力. |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |