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桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
引用本文:管丹,史梦雅,胡晓,关伟,刘悦萍.桃果实PpARF1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].北京农学院学报,2018,33(1):1-5.
作者姓名:管丹  史梦雅  胡晓  关伟  刘悦萍
作者单位:北京农学院植物科学技术学院,北京,102206;北京市平谷区人民政府果品办公室,北京,101200;北京农学院生物科学与工程学院/农业部华北都市农业重点实验室,北京,102206
基金项目:2015年度新型生产经营主体科技能力提升工程项目
摘    要:【目的】为了探讨转录因子ARF1(Auxin Response Factor)对桃果实发育调控的机制。【方法】以‘24号’桃果实为试验材料,构建桃ARF1基因的原核表达载体pET32a-PpARF1,转化到BL21(DE3)中诱导表达菌体蛋白,筛选出重组蛋白的最适表达条件,按照最适条件大量摇菌诱导表达蛋白,并进行重组蛋白的纯化,最后用纯化诱导后的重组蛋白制备多克隆抗体及WB检测。【结果】SDS-PAGE电泳检测得到pET32a-PpARF1重组蛋白的位置大约在95.0kD,在37℃,转速250r/min,IPTG 0.10mmol/L,诱导4h,诱导出的蛋白表达量最大。免疫印迹试验显示所得抗血清能很好检测到目的蛋白。【结论】ARF转录因子参与生长素调控桃果实发育成熟的过程。

关 键 词:桃果实  ARF  原核表达  目的蛋白  western  blot  (WB)检测

Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of PpARF1 protein in peach fruit
GUAN Dan,SHI Mengya,HU Xiao,GUAN Wei,LIU Yueping.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of PpARF1 protein in peach fruit[J].Journal of Beijing Agricultural College,2018,33(1):1-5.
Authors:GUAN Dan  SHI Mengya  HU Xiao  GUAN Wei  LIU Yueping
Abstract:
Keywords:
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