| 陆地棉GhPLDα基因的克隆、序列分析及表达 |
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| 引用本文： | 谭兰,李榕,袁哈利,贺怡,梁卓,谢全亮,李鸿彬.陆地棉GhPLDα基因的克隆、序列分析及表达[J].新疆农业科学,2014,51(5):792. |
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| 作者姓名： | 谭兰 李榕 袁哈利 贺怡 梁卓 谢全亮 李鸿彬 |
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| 作者单位： | 石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832003;石河子大学生命科学学院,新疆石河子832003;石河子大学农业生物技术重点实验室,新疆石河子832003 |
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| 摘 要： | 目的]棉花磷脂酶D(GhPLDα)基因的克隆、序列功能结构域分析及表达.方法]以陆地棉胚珠和纤维为材料提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增得到PLDα基因的cDNA片段,将其构建到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达,利用分光光度法检测酶活性,采取RT-PCR方法检测基因表达.结果]从发育的棉花胚珠和纤维混合材料中克隆得到的磷脂酶基因的开放读码框为2 421 bp,编码包含807个氨基酸的蛋白质,分子量约为88 kDa.通过同源序列比对和功能结构域分析,GhPLDα具有典型的磷脂酶D家族(HKD)结构域,同时还存在蛋白激酶C结构域2(C2结构域).构建了pET28a-GhPLDα原核表达载体;获得分子量约为88 kDa左右的重组蛋白GhPLDα.半定量RT-PCR结果表明GhPLDα基因可能参与棉花胚珠与纤维发育过程.结论]GhPLDα基因的克隆、序列分析和表达为进一步研究棉花GhPLDα基因在胚珠和纤维发育中过程的功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 棉花 GhPLDα基因 表达 |
| 收稿时间： | 2014-05-25 |
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