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竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用
引用本文:叶碧欢,陈友吾,舒金平,张威,张亚波,李海波,宋其岩. 竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用[J]. 浙江农林大学学报, 2021, 38(3): 644-651. DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200492
作者姓名:叶碧欢  陈友吾  舒金平  张威  张亚波  李海波  宋其岩
作者单位:1.浙江省林业科学研究院,浙江 杭州 3100232.中国林业科学研究院 亚热带林业研究所,浙江 杭州 311400
基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(LQ19C160006);浙江省省属科研院所资助项目(2019F1068-1)
摘    要:   目的   筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因,为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。   方法   基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据,利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物,分析相关性和扩增效率;利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a),并验证其表达稳定性。   结果   GeNorm分析结果显示:PRS27a和RPS3的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH;最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示:RPL13α的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示:β-actin和GAPDH的P>0.5,不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因,6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。   结论   PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。图3表3参27

关 键 词:森林保护学   竹林金针虫   平沙绿僵菌   内参基因   实时荧光定量PCR
收稿时间:2020-07-28

Screening and application of reference genes for qRT-PCR in bamboo wireworm
YE Bihuan,CHEN Youwu,SHU Jinping,ZHANG Wei,ZHANG Yabo,LI Haibo,SONG Qiyan. Screening and application of reference genes for qRT-PCR in bamboo wireworm[J]. Journal of Zhejiang A&F University, 2021, 38(3): 644-651. DOI: 10.11833/j.issn.2095-0756.20200492
Authors:YE Bihuan  CHEN Youwu  SHU Jinping  ZHANG Wei  ZHANG Yabo  LI Haibo  SONG Qiyan
Affiliation:1.Zhejiang Academy of Forestry, Hangzhou 310023, Zhejiang, China2.Institute of Subtropical Forestry, Chinese Academy of Forestry, Hangzhou 311400, Zhejiang, China
Abstract:
Keywords:
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