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牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用
引用本文:韩猛立,李 娜,黄 新,薄新文,王新华,赵玉龙,钟发刚.牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用[J].西北农业学报,2010,19(10):6-9.
作者姓名:韩猛立  李 娜  黄 新  薄新文  王新华  赵玉龙  钟发刚
作者单位:1. 石河子大学,动物科技学院,新疆石河子,832000;新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子,832000
2. 新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室,新疆石河子,832000
基金项目:“973”计划前期研究专项项目(2008CB117017); 兵团博士资金项目(2007JC15)
摘    要:参照多株不同基因型和基因亚型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR相对保守的基因序列,设计3对引物,其中1对能够扩增不同基因型BVDV 5′UTR片段(288 bp),另2对分别能够扩增BVDV-1型和BVDV-2型5′UTR片段(195 bp和116 bp)。扩增片段大小与预计片段一致。对PCR反应条件进行优化,建立了一种特异、敏感的RT-nPCR检测方法。敏感性试验表明,敏感性为10-2TCID50/mL。特异性试验表明,对猪瘟兔化弱毒疫苗株、牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的检测结果均为阴性。通过对新疆部分地区无BVD临床症状的牛场208份奶牛血样检测,阳性率为50.43%,表明该方法具有快速、简便、特异性强和灵敏度高等特点,可以作为BVDV隐性感染临床诊断的有效方法。

关 键 词:牛病毒性腹泻病毒  RT-nPCR  检测  应用  

Establishment and Application of Nested PCR Assay for Bovine Viral Diarrhea Virus Detection
HAN Mengli,LI N,HUANG Xin,BO Xinwen,WANG Xinhu,ZHAO Yulong and ZHONG Fagang.Establishment and Application of Nested PCR Assay for Bovine Viral Diarrhea Virus Detection[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2010,19(10):6-9.
Authors:HAN Mengli  LI N  HUANG Xin  BO Xinwen  WANG Xinhu  ZHAO Yulong and ZHONG Fagang
Institution:HAN Mengli1,2,LI Na2,HUANG Xin2,BO Xinwen2,WANG Xinhua2,ZHAO Yulong2 and ZHONG Fagang2 (1.College of Animal Science and Technology,Shihezi University,Shihezi Xinjiang 832000,China,2.Key Laboratory of Sheep Breeding and Development Technology,Xinjiang Production & Construction Corps,China)
Abstract:
Keywords:Bovine viral diarrhea virus  RT-nPCR  Detection  Application  
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