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mRNA差异显示技术的研究进展
引用本文:陈永华,严钦泉,余建蒲,肖国樱.mRNA差异显示技术的研究进展[J].西北农业学报,2005,14(2):9-12,43.
作者姓名:陈永华  严钦泉  余建蒲  肖国樱
作者单位:1. 湖南农业大学,湖南,长沙,410128;中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南,长沙,410125
2. 湖南农业大学,湖南,长沙,410128
3. 望城县成人中等专业学校,湖南,长沙,410218
4. 中国科学院亚热带农业生态研究所,湖南,长沙,410125
基金项目:湖南省杰出青年基金(03JJY1004),中国科学院知识创新工程重要方向项目(KZCX3-SW-434)。
摘    要:针对mRNA差异显示技术中的假阳性高和放射性污染等缺陷.文章从改进引物设计、应用非放射性标记、优化PCR参数、假阳性鉴定等方而进行了综述。①采用4种兼并或单碱基引物作锚定引物;用特异和长序列(≥20bp)专一性引物作为随机引物.可增加特异性;在锚定引物之前加上了一段T 启动子序列.在随机引物前加上一段M 重复序列.可使DDRT—PCR的体系的扩增特异性更一致。②针对放射性同位素检测法的缺点。文章提出并比较了几种常用的非放射性同位素标记方法。③保证起始(模板)mRNA质量和浓度,降低dNTP浓度,选择最适的反转录和PCR退火温度.可优化PCR参数。④用两种不同的反转录酶进行反转录平行实验,很容易区分出RNA制备过程中造成的假阳性.目前假阳性鉴定大多还是以Northern印迹为基础,再作些适当的改进。

关 键 词:mRNA差异显示技术  研究进展  Northern  非放射性同位素  非放射性标记  dNTP浓度  锚定引物  随机引物  放射性污染  启动子序列  假阳性  重复序列  标记方法  退火温度  平行实验  反转录酶  制备过程  R参数  特异性  PCR  单碱基  专一性
文章编号:1004-1389(2005)02-0009-04
收稿时间:2004/10/8 0:00:00
修稿时间:2004/11/23 0:00:00

Research Progress on mRNA Differentially Display Technology
CHEN Yong-hu,YAN Qin-quan,YU Jian-pu and XIAO Guo-ying.Research Progress on mRNA Differentially Display Technology[J].Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica,2005,14(2):9-12,43.
Authors:CHEN Yong-hu  YAN Qin-quan  YU Jian-pu and XIAO Guo-ying
Institution:CHEN Yong-hua~
Abstract:
Keywords:mRNA differentially display technology  Primer design  Non-radioactive marker  False-positive
本文献已被 CNKI 维普 万方数据 等数据库收录!
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