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ETEC菌毛蛋白K99抗体PPA-ELISA检测 方法的建立及初步应用
引用本文:谢金文,白耀国,李书光,王金良,曲光刚,苗立中,沈志强.ETEC菌毛蛋白K99抗体PPA-ELISA检测 方法的建立及初步应用[J].安徽农业大学学报,2015,42(2):237-242.
作者姓名:谢金文  白耀国  李书光  王金良  曲光刚  苗立中  沈志强
作者单位:1. 山东省滨州畜牧兽医研究院 山东省畜禽用蜂胶疫苗研究开发推广中心,滨州256600;山东绿都生物科技有限公司,滨州256600;2. 山东绿都生物科技有限公司,滨州,256600
基金项目:山东省自然科学科学基金青年基金项目(ZR2014CQ009);滨州市2013年科技发展计划项目(2013GG0304);山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(SDAIT-06-011-14)共同资助
摘    要:以纯化的大肠埃希菌K99菌毛蛋白为包被抗原,建立检测大肠埃希氏菌K99 Ig G抗体的间接ELISA方法。确定间接ELISA的最适反应条件,即抗原包被的ELISA板4℃过夜,最适抗原包被浓度为4.94μg·m L-1,兔抗体稀释倍数为1:50,猪抗体稀释倍数为1:200,确定最佳封闭液为100 g·L-1脱脂奶粉,最佳封闭时间为0.5 h,血清反应时间为1 h,二抗最适浓度梯度为1:2000,反应时间为37℃0.5 h,底物室温反应时间为37℃10 min,阴阳性临界值兔血清为0.25、猪血清为0.35。试验证实该间接PPA-ELISA方法的特异性强、敏感性高、重复性好,可以为疫苗效力检验和流行病学调查提供参考方法。

关 键 词:ETEC  K99  PPA-ELISA  抗体  检测  建立

Development and preliminary application of PPA-ELISA in detection of antibodies against K99 fimbrial protein
XIE Jinwen,BAI Yaoguo,LI Shuguang,WANG Jinliang,QU Guanggang,MIAO Lizhong and SHEN Zhiqiang.Development and preliminary application of PPA-ELISA in detection of antibodies against K99 fimbrial protein[J].Journal of Anhui Agricultural University,2015,42(2):237-242.
Authors:XIE Jinwen  BAI Yaoguo  LI Shuguang  WANG Jinliang  QU Guanggang  MIAO Lizhong and SHEN Zhiqiang
Institution:XIE Jinwen;BAI Yaoguo;LI Shuguang;WANG Jinliang;QU Guanggang;MIAO Lizhong;SHEN Zhiqiang;Shandong Binzhou Animal Science & Veterinary Medicine Institute, Shandong Research & Development Center of Veterinary Propolis Vaccines;Shandong Lvdu Biotechnology Co., Ltd.;
Abstract:
Keywords:ETEC  K99  PPA-ELISA  antibody  detection  establishment
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