| 检测猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 杨春华,胡慧,钟毅,韩志涛,祝建新.检测猪繁殖与呼吸综合征病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及初步应用[J].浙江农业学报,2010,22(6). |
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| 作者姓名： | 杨春华 胡慧 钟毅 韩志涛 祝建新 |
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| 基金项目： | 国家质检局科技计划项目 |
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| 摘 要： | 利用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5基因部分片段,并克隆到pGEM-T Easy载体上,得到重组质粒作为荧光定量PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释模板,进行SYBR Green I荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立PRRSV的荧光定量PCR检测方法.该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,与猪圆环病毒、猪乙型脑炎病毒、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪流感病毒和猪细小病毒不发生交叉反应,具有良好的特异性和重复性;对16份临床疑似病料进行了检测,发现15份均为荧光定量PCR阳性,而常规RT-PCR只能检测出12份阳性.结果表明,建立的实时荧光定量PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于临床PRRSV感染的早期诊断以及分子流行病学调查.
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| 关 键 词： | 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5基因 实时荧光定量PCR SYBR Green I |
Establishment and preliminary application of a SYBR Green I real-time PCR method for detection of PRRSV |
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| YANG Chun-hua,HU Hui,ZHONG Yi,HAN Zhi-tao,ZHU Jian-xin.Establishment and preliminary application of a SYBR Green I real-time PCR method for detection of PRRSV[J].Acta Agriculturae Zhejiangensis,2010,22(6). |
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| Authors: | YANG Chun-hua HU Hui ZHONG Yi HAN Zhi-tao ZHU Jian-xin |
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