| 单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 徐海,王健,郭长明,董洪燕,邓碧华,侯继波.单域抗体T7噬菌体展示文库构建与鉴定[J].浙江农业学报,2021,33(1):27. |
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| 作者姓名： | 徐海 王健 郭长明 董洪燕 邓碧华 侯继波 |
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| 作者单位： | 1.江苏农牧科技职业学院 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室,江苏 泰州 2253002.江苏省农业科学院 动物免疫工程研究所,江苏 南京 210014 |
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| 基金项目： | 江苏农牧科技职业学院院级课题(NSF201902) |
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| 摘 要： | 优化噬菌体展示文库构建策略,获得高品质羊驼源天然纳米抗体T7噬菌体展示文库,并对文库质量进行鉴定。分离羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR扩增羊驼重链抗体可变区(VHH)基因,插入T7 select 415-1b噬菌体载体构建文库,计算文库的库容量,测定文库传代稳定性。测序分析VHH基因的多样性和纳米抗体氨基酸序列特征。Western-blot检测纳米抗体在噬菌体表面的表达情况,电镜观察文库中重组噬菌体颗粒形态。结果表明,构建羊驼源纳米抗体T7噬菌体展示文库,有效库容达到2.73×109 PFU;纳米抗体与羊驼源抗体同源性高,氨基酸序列显示纳米抗体特征区域,并其在噬菌体表面高拷贝表达;重组噬菌体颗粒结构完整,但随着传代出现插入基因的丢失。
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| 关 键 词： | 羊驼 纳米抗体 T7噬菌体 表面展示 |
| 收稿时间： | 2020-05-14 |
Construction and identification of nanobody T7 phage display library |
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| XU Hai,WANG Jian,GUO Changming,DONG Hongyan,DENG Bihua,HOU Jibo.Construction and identification of nanobody T7 phage display library[J].Acta Agriculturae Zhejiangensis,2021,33(1):27. |
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| Authors: | XU Hai WANG Jian GUO Changming DONG Hongyan DENG Bihua HOU Jibo |
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| Institution: | 1. Jiangsu Key Laboratory for High-Tech Research and Development of Veterinary Biopharmaceuticals, Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational College, Taizhou 225300, China
2. Institute of Veterinary Immunology & Engineering, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | alpaca nanobody T7 phage surface display |
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