检测坦布苏病毒病抗体NS1-ELISA方法的建立与初步应用 |
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引用本文: | 谢星星,李祥瑞,李银,赵冬敏,黄欣梅,韩凯凯,刘宇卓,游园.检测坦布苏病毒病抗体NS1-ELISA方法的建立与初步应用[J].浙江农业学报,2014(1). |
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作者姓名: | 谢星星 李祥瑞 李银 赵冬敏 黄欣梅 韩凯凯 刘宇卓 游园 |
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作者单位: | 南京农业大学动物医学院;江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31172345);江苏省自然科学基金(BK2012376);江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(12)5052) |
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摘 要: | 为建立快速检测鸭坦布苏病毒病抗体的血清学方法,本研究利用鹅坦布苏病毒JS804株非结构蛋白NS1基因序列将其克隆至原核表达载体pET32a上,建立重组表达pET32a-NS1,转化至BL21(DE3)中。经IPTG诱导得到NS1融合蛋白,融合蛋白均以包涵体形式存在,包涵体经过变性和复性,纯化的坦布苏病毒NS1蛋白作为包被抗原,在最佳检测条件基础上,建立了检测坦布苏病毒病(Tembusu virus disease,简称TVD)抗体的间接ELISA方法。结果在条件优化后抗原最适包被量为1.925μg·孔-1,抗原最佳包被条件为37℃放置1 h后4℃过夜,血清的最佳稀释度为1∶200,最佳封闭时间为1 h,酶标二抗最适稀释度为1∶1 000,显色时间10 min。阴阳性临界值判定标准为0.346。用建立的间接ELISA方法检测禽流感、新城疫、传染性支气管炎、TVD阳性血清样品均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。板内和板间重复试验的最大变异系数分别为6.7%和8.2%,显示该方法具有很好的稳定性。用间接NS1-ELISA方法对81份疑似鸭坦布苏病毒病血清样品进行检测,有43份样品呈现阳性,E-ELISA有48份呈阳性结果,证明该方法具有较高的敏感性。NS1-ELISA方法的建立为TVB的诊断和流行病学调查提供了一种新的方法。
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关 键 词: | 坦布苏病毒 NS蛋白 间接ELISA 抗体 |
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