| 牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 常敬伟,邢思毅,常春龙,毕莹,王士霞,李田田,周玉龙,倪宏波.牛病毒性腹泻/黏膜病毒抗体间接ELISA检测方法的建立[J].黑龙江八一农垦大学学报,2016(6):74-78. |
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| 作者姓名： | 常敬伟 邢思毅 常春龙 毕莹 王士霞 李田田 周玉龙 倪宏波 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆,163319 |
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| 基金项目： | 黑龙江省农垦总局“十二五”重点科技攻关项目(HNK125B-11-10A、HNK125B-11-02) |
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| 摘 要： | 为建立一种检测牛病毒性腹泻、黏膜病病毒抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白并纯化,使用纯化后的蛋白作为包被抗原。确定最佳抗原包被浓度为6μg·m L-1,最佳血清稀释度为1∶80,最佳包被液为碳酸缓冲液,最佳盐封闭液为5%脱脂乳,最佳血清作用时间为60 min,酶标抗体作用最佳浓度为1∶10 000;最佳底物作用时间为5 min,阳性临界值为D450 nm≥0.282。与IDEXX的BVDV间接ELISA试剂盒比较,总符合率为91.5%,板内和板间重复性试验变异系数均小于10%。该方法与牛副流感病毒Ⅲ型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒和牛冠状病毒阳性血清无交叉反应。因此,该ELISA诊断方法可用于大批量样本抗体水平监测和流行病学调查。
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| 关 键 词： | 牛病毒性腹泻病毒 E2蛋白 间接ELISA |
Establishment of the Indirect ELISA Detection Method of Bovine Viral Diarrhea Virus |
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