| 定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性 |
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| 引用本文： | 代健,樊自尧,杨轩,等.定点突变阻止金黄色葡萄球菌α-溶血素溶血活性[J].黑龙江八一农垦大学学报,2014(2):44-49,112. |
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| 作者姓名： | 代健 樊自尧 杨轩 等 |
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| 作者单位： | [1]黑龙江八一农垦大学动物科技学院,大庆163319 [2]黑龙江八一农垦大学生命技术学院,大庆163319 |
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| 基金项目： | 基金项目：国家自然基金委资助项目（31072120）;黑龙江省农垦总局资助项目（HNK11A-08-01-04）. |
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| 摘 要： | 金黄色葡萄球菌分泌的α-溶血素是导致肺炎的重要致病因子。为进一步研究金黄色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病机理以及对其进行免疫预防,对α-hla第35位氨基酸进行了定点突变。用聚合酶链式反应(PCR)技术,从S.aureus wood46株基因组中扩增出α-hla基因,再利用重叠延伸PCR技术,将第35位带正电荷的组氨酸(密码子为CAC)突变为非极性的亮氨酸(密码子为CTC)。hlaH35L基因测序结果显示第35位的组氨酸突变为亮氨酸,构建的重组表达质粒pET-28a-c(+)/hla和pET-28a-c(+)/hlaH35L在E.coli BL21(DE3)中得到表达,重组蛋白α-Hla及hlaH35L大小均为33.4 kDa,α-Hla引起兔红细胞溶血,hlaH35L未引起兔红细胞溶血。成功表达并获得了失去溶血毒性的重组蛋白hlaH35L。
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| 关 键 词： | 金黄色葡萄球菌 α-溶血素 定点诱变 原核表达 溶血活性 |
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