| 茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 余有本,江昌俊,王朝霞,李叶云,宛晓春. 茶树咖啡碱合酶cDNA在大肠杆菌中的表达[J]. 南京农业大学学报, 2004, 27(4): 105-109 |
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| 作者姓名： | 余有本 江昌俊 王朝霞 李叶云 宛晓春 |
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| 作者单位： | 安徽农业大学农业部茶叶生物化学和生物技术重点开放实验室,安徽,合肥,230036;安徽省教育学院,安徽,合肥,230061 |
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| 基金项目： | 安徽省自然科学基金 (2 0 0 3kj0 79)，江苏省自然科学基金 (BK2 0 0 410 1) |
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| 摘 要： | 通过RT-PCR法扩增出茶树咖啡碱合酶(TCS)cDNA编码区全序列，并将其克隆到表达载体pET32a( )中，得到重组质粒pET-TCS，在表达宿主菌B121trxB(DE3)中高效表达，产生相对分子质量约为62000的融合蛋白。该融合蛋白包括112个氨基酸残基的硫氧还原蛋白及370个氨基酸残基的茶树TCS蛋白。实验结果表明，随着诱导时间的延长，表达的融合蛋白产量逐渐增加，表达蛋白总量最高可达到菌体总蛋白的39．14％；在15、25和37℃ 3个不同的诱导温度下，均能诱导产生融合蛋白，而且产生的总量及其可溶性部分所占比例均随诱导温度升高而增加；在菌体的各个部位中，融合蛋白主要在细胞质中以可溶的形式进行表达，有少量在外周质中表达或以包涵体形式在细胞质中表达。另外，体外酶促反应表明，表达的融合蛋白能催化可可碱甲基化生成咖啡碱，具有正常的生物学活性。
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| 关 键 词： | 茶树 咖啡碱合酶cDNA 大肠杆菌 表达 |
| 文章编号： | 1000-2030(2004)04-0105-05 |
| 修稿时间： | 2003-10-30 |
Expression of tea caffeine synthase cDNA in Escherichia coli |
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| YU You-ben,JIANG Chang-jun ,WANG Zhao-xia,LI Ye-yun,WAN Xiao-chun. Expression of tea caffeine synthase cDNA in Escherichia coli[J]. Journal of Nanjing Agricultural University, 2004, 27(4): 105-109 |
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| Authors: | YU You-ben JIANG Chang-jun WANG Zhao-xia LI Ye-yun WAN Xiao-chun |
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| Affiliation: | YU You-ben1,JIANG Chang-jun 1*,WANG Zhao-xia2,LI Ye-yun1,WAN Xiao-chun1 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | tea plant(Camellia sinensis) caffeine synthase cDNA Escherichia coli expression |
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