过氧化氢诱导原代大鼠睾丸间质细胞氧化损伤模型的建立

为了建立体外模拟氧自由基诱导的细胞氧化损伤模型,本试验采用Percoll密度梯度离心法纯化原代大鼠Leydig细胞,并鉴定特异性蛋白3β-HSD;采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率、线粒体膜电位、ROS以及O·-2含量,比色法测定·OH、MDA的含量以及抗氧化物酶SOD、CAT和POD的活性。结果显示:特异性蛋白3β-HSD鉴定后,荧光显微镜观察到大部分细胞呈现特异性荧光。MTT测定结果显示,300~1 000μmol·L-1H2O2处理细胞均可极显著降低细胞活力(P0.01);300μmol·L-1H2O2处理可显著提高Leydig的凋亡率以及增加ROS含量(P0.05)和·OH含量(P0.01),但可显著降低线粒体膜电位(P0.05)。H2O2处理对Leydig细胞内SOD、CAT和POD的活性无显著影响(P0.05),但可显著提高细胞内MDA的含量(P0.05)。结论:300μmol·L-1H2O2处理Leydig细胞8 h可以诱导细胞氧化损伤从而建立体外模拟氧自由基诱导细胞氧化损伤模型。