家蚕抗菌肽基因的克隆及重组蛋白的自诱导表达 |
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引用本文: | 谢昆,王靖,王丽仙,朱灵明,尹建华,叶青霞,孙艳.家蚕抗菌肽基因的克隆及重组蛋白的自诱导表达[J].华北农学报,2018(1). |
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作者姓名: | 谢昆 王靖 王丽仙 朱灵明 尹建华 叶青霞 孙艳 |
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作者单位: | 红河学院生命科学与技术学院;云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室;云南省昆虫生物医药研发重点实验室; |
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摘 要: | 抗菌肽是生物体内具有抗菌活性的一种小分子物质,在昆虫细胞抵御外源微生物的感染过程中发挥着重要作用。为研究家蚕抗菌肽基因克隆、重组抗菌肽的表达和纯化方法,以家蚕中肠组织总RNA为模板,设计4对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增BmCecropin、BmCecropin B6、BmCecropin D和Bmmoricin这4种抗菌肽基因,通过自诱导方式原核表达4种抗菌肽重组蛋白,并对4种抗菌肽重组蛋白进行Ni-NTA亲和层析和超滤纯化。结果表明,克隆的BmCecropin、BmCecropin B6、BmCecropin D和Bmmoricin这4种抗菌肽的基因大小分别为198,108,105,129 bp,通过自诱导方式表达的BmCecropin、BmCecropin B6、BmCecropin D和Bmmoricin这4种抗菌肽重组蛋白,经SDS-PAGE电泳检测,大小分别为24,21,20,22 ku,经Ni-NTA亲和层析和超滤纯化后的4种抗菌肽重组蛋白条带单一。结果可为4种抗菌肽重组蛋白后续的抑菌试验和在抑菌剂、化妆品和防腐剂等方面的进一步应用奠定基础。
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