| 烟草花叶病毒南瓜分离物CP基因的克隆、序列分析及其原核表达 |
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| 引用本文： | 刘金亮,王凤婷,魏毅,潘洪玉,张世宏.烟草花叶病毒南瓜分离物CP基因的克隆、序列分析及其原核表达[J].华北农学报,2010,25(5). |
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| 作者姓名： | 刘金亮 王凤婷 魏毅 潘洪玉 张世宏 |
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| 基金项目： | "十一五"国家科技支撑计划项目，吉林大学博士科研启动基金，吉林大学基本科研业务费项目 |
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| 摘 要： | 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原.采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达.结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜.对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.5%～99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%～99.4%.根据完整CP 基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为5个组,其中TMV-liaocheng与Nakron Pathom、Fujian、017等分离物属于Ⅳ组.TMV-liaocheng可能发生过重组.将TMV-liaocheng CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS诱导表达出分子量约20 kDa的融合蛋白,并用Ni2+ -NTA His · Bind(R)树脂纯化,纯化后的蛋白可直接用于制备特异性的抗血清,为准确、快速地检测TMV奠定了基础.
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| 关 键 词： | 南瓜 烟草花叶病毒 CP基因 序列分析 原核表达 |
Cloning,Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of the Coat Protein Gene of Tobacco Mosaic Virus from Pumpkin Plant |
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| LIU Jin-liang,WANG Feng-ting,WEI Yi,PAN Hong-yu,ZHANG Shi-hong.Cloning,Sequence Analysis and Prokaryotic Expression of the Coat Protein Gene of Tobacco Mosaic Virus from Pumpkin Plant[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2010,25(5). |
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| Authors: | LIU Jin-liang WANG Feng-ting WEI Yi PAN Hong-yu ZHANG Shi-hong |
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