| 两种方法对广玉兰ISSR-PCR反应体系的优化比较 |
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| 引用本文： | 陈亮明,相阳,张冬林,李志辉,陈永华,马倩,彭婧.两种方法对广玉兰ISSR-PCR反应体系的优化比较[J].种子,2008,27(6). |
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| 作者姓名： | 陈亮明 相阳 张冬林 李志辉 陈永华 马倩 彭婧 |
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| 作者单位： | 1. 中南林业科技大学资源与环境学院,湖南长沙,410004
2. 山东省济宁市园林管理局科研所,山东济宁,272100 |
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| 基金项目： | 湖南省芙蓉学者专项基金
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中南林业科技大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 采用单因子和正交设计2种方法，对影响广玉兰ISSR-PCR反应体系的5个因素（Taq酶、Mg^2＋、dNTP、引模板DNA）进行优化。结果表明：正交设计采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平与单因子试验找出影响因素最佳反应水平有一定差异，通过综合比较分析，最终建立了广玉兰ISSR．PCR的最佳反应体系：在20μl的反应体系中，TaqDNA聚合酶1．0U、Mg^2＋1．2—1．5mmoL／L、dNTP1．80mmoL／L、引物0．5—0．6μmoL／L、30ng模板DNA、10×PCR buffer。同时，通过PCR比较，确定延伸时间为2min，循环次数为35个较为合适，确定了引物最佳退火温度，得到了广玉兰ISSR—PCR反应的最佳扩增程序。
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| 关 键 词： | 广玉兰 ISSR-PCR 单因子试验 正交设计 方法 广玉兰 反应体系 优化比较 System Reaction Optimization Methods 扩增程序 退火温度 循环次数 时间 延伸 buffer 聚合酶 直观分析法 综合 差异 单因子试验 水平 |
Comparison on Two Methods of Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Magnolia grandiflora |
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| CHEN Liang-ming,XIANG Yang,ZHANG Dong-lin,LI Zhi-hui,CHEN Yong-hua,MA Qian,PENG Jing.Comparison on Two Methods of Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Magnolia grandiflora[J].Seed,2008,27(6). |
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| Authors: | CHEN Liang-ming XIANG Yang ZHANG Dong-lin LI Zhi-hui CHEN Yong-hua MA Qian PENG Jing |
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