| 拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化 |
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| 引用本文： | 孙博,卜媛媛,高野哲夫,柳参奎.拟南芥未知基因At018融合蛋白原核表达条件的优化及纯化[J].分子植物育种,2015(4):887-890. |
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| 作者姓名： | 孙博 卜媛媛 高野哲夫 柳参奎 |
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| 作者单位： | 1. 东北林业大学东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室，盐碱地生物资源环境研究中心，哈尔滨，150040
2. 东京大学亚洲生物资源环境研究中心，东京，188-0002 |
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| 基金项目： | 中国教育部科研创新团队计划(IRT13053)资助 |
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| 摘 要： | 本课题组在前期的研究中利用Al Cl3胁迫筛选碱茅全长c DNAs酵母表达文库获得到一个与铝毒害相关的未知基因(基因编号为018,用put018表示),该基因与拟南芥中未知基因(基因号为At5g57345,本研究中用At018表示)有较高的同源性。为了获得At018的纯化蛋白,本研究将拟南芥At018基因克隆后构建原核表达载体p GEX-6p-3-At018,再将其转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。同时运用传统方法优化诱导条件,以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析结果表明,30℃下0.1 mmol/L IPTG的条件下诱导3 h后,GST-At018融合蛋白的表达量最大,蛋白分子质量与预测值相符,该蛋白主要以可溶性形式存在;接着利用Glutathione Sepharose4 Fast Flow亲核层析树脂纯化最终获得GST-At018融合蛋白。本研究可为进一步进行At018的功能解析提供基础。
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| 关 键 词： | 拟南芥 At018基因 原核表达 蛋白纯化 |
Purification and Optimization of Prokaryotic Expression of Unknow Gene (At018) of Arabidopsis |
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| Sun Bo
,
Bu Yuanyuan
,
Takano Tetsuo
,
Liu Shenkui.Purification and Optimization of Prokaryotic Expression of Unknow Gene (At018) of Arabidopsis[J].Molecular Plant Breeding,2015(4):887-890. |
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| Authors: | Sun Bo Bu Yuanyuan Takano Tetsuo Liu Shenkui |
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| Institution: | Sun Bo;Bu Yuanyuan;Takano Tetsuo;Liu Shenkui;Key Laboratory of Saline-alkali Vegetation Ecology Restoration in Oil Field (SAVER),Ministry of Education,Alkali Soil Natural Environmental Science Center (ASNESC),Northeast Forestry University;Asian Natural Environmental Science Center (ANESC),University of Tokyo; |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Arabidopsis At018 gene Prokaryotic expression Protein purification |
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