| 通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法 |
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| 引用本文： | 李秋月,王小柯,张亚飞,孙珍珠,王旭,江东.通过优化gRNA设计提高CRISPR/Cas9系统中基因编辑效率的方法[J].分子植物育种,2019,17(10):3274-3282. |
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| 作者姓名： | 李秋月 王小柯 张亚飞 孙珍珠 王旭 江东 |
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| 作者单位： | 西南大学柑桔研究所,重庆,400712;西南大学柑桔研究所,重庆,400712;西南大学柑桔研究所,重庆,400712;西南大学柑桔研究所,重庆,400712;西南大学柑桔研究所,重庆,400712;西南大学柑桔研究所,重庆,400712 |
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| 基金项目： | 重庆市科技创新专项;江西地方特色果树种质资源创新与利用专项 |
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| 摘 要： | CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于动物、植物、真菌、细菌的新一代基因定点编辑技术,如何提高g RNA的编辑效率是该技术的关键点也是许多研究者关注的焦点。本研究利用CRISPR/Cas9技术对番茄miR167a前体序列进行基因编辑,根据番茄miR167a前体序列在线设计候选g RNA,同时结合体外编辑检测的方法筛选出能够在体外成功编辑的g RNA-G1,把其连接到含有荧光标记的pP1C.1C表达载体,转化番茄子叶,产生愈伤组织数116个,得到5个含有表达载体的材料,经测序发现,其中3个材料发生了编辑。结果表明,通过体外检测和在线软件设计相结合的方法来快速检测g RNA的编辑效率,能筛选出最优的g RNA用于载体的构建,与未采用体外编辑检测来设计g RNA的方法相比,显著提高了CRISPR/Cas9的编辑效率。本研究通过优化g RNA,创新了一种高效利用CRISPR/Cas9进行基因编辑的方法。
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| 关 键 词： | gRNA设计 CRISPR/Cas9 体外检测 基因编辑 |
Methods to Improve Gene Editing Efficiency in CRISPR/Cas9 System by Optimizing gRNA |
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| Li Qiuyue,Wang Xiaoke,Zhang Yafei,Sun Zhenzhu,Wang Xu,Jiang Dong.Methods to Improve Gene Editing Efficiency in CRISPR/Cas9 System by Optimizing gRNA[J].Molecular Plant Breeding,2019,17(10):3274-3282. |
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| Authors: | Li Qiuyue Wang Xiaoke Zhang Yafei Sun Zhenzhu Wang Xu Jiang Dong |
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| Institution: | (Citrus Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Chongqing, 400712) |
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| Abstract: | Li Qiuyue;Wang Xiaoke;Zhang Yafei;Sun Zhenzhu;Wang Xu;Jiang Dong(Citrus Research Institute of Chinese Academy of Agricultural Sciences, Chongqing, 400712) |
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| Keywords: | gRNA design CRISPR/Cas9 In vitro editing detect Gene editing |
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