半巢式RT-Reahime PCR检测马铃薯Y病毒脉坏死株系

马铃薯Y病毒脉坏死株系（Potato virus Y，PVY^n）是马铃薯中一个非常重要的病毒病害。本文根据PVY^n基因组中RNA依赖的RNA聚合酶基因序列保守区域，设计合成了3条巢式PCR引物和1条TaqMAN荧光探针，建立了半巢式RT—RealtimePCR检测PVY^n的新方法。该方法采用E．Z．N．A^TM．陕速提取植物总RNA，并有机地结合了巢式PCR和TaqMAN探针检测技术。第二步半巢式RT-Realtime PCR既是对第一步信号的进一步放大，也是对第一步PCR产物的确认，因此，检测的准确性、灵敏度比巢式PCR、Realtime PCR等方法高。实验结果表明，该方法检测灵敏度可达4fg／μL植物总RNA。